首先我們來簡單了解一下熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡的工作原理。
熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) ：熒光顯微鏡是以紫外線為光源，樣品自身發(fā)光或者經(jīng)過熒光染料或熒光抗體染色處理之后，照射被檢物體，受紫外激發(fā)產(chǎn)生熒光，探測器檢測，在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。

激光共聚焦顯微鏡(laser scanning confocal microscopy,LSCM)：全稱是激光掃描共聚焦熒光顯微鏡，是一種利用計(jì)算機(jī)、激光和圖像處理技術(shù)獲得生物樣品三維數(shù)據(jù)，以激光作為光源，逐點(diǎn)激發(fā)樣品內(nèi)熒光，采用精密針孔濾波技術(shù)，有效抑制了非聚焦平面的雜散光，具有層析成像能力和很高的成像信噪比。在熒光顯微鏡的基礎(chǔ)上添加了激光掃描裝置，激光從發(fā)射器發(fā)出，在照明針孔分成三束，經(jīng)過分光鏡反射，在物鏡處折射，聚焦于樣品的焦平面上，如果樣品中有被激光激發(fā)的熒光基團(tuán)，就會(huì)產(chǎn)生熒光，按照激光進(jìn)入的光路原路返回，返回的熒光在成像系統(tǒng)（一種可以把光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)傳感器）中再次聚焦成相。因?yàn)樵趦蓚€(gè)位置（樣品和成像系統(tǒng)）聚焦，所以叫做共聚焦。

熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡的區(qū)別。

熒光顯微鏡又叫寬場熒光顯微鏡，當(dāng)成像面較厚，焦面上方下方的干擾信號(hào)都會(huì)被觀察到，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此熒光顯微鏡只能觀察靜態(tài)的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。
激光共聚焦顯微鏡是在傳統(tǒng)熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上，附加了激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，通過計(jì)算機(jī)控制來進(jìn)行數(shù)字化圖像采集和處理的系統(tǒng)。可以觀察亞細(xì)胞層次的一些生化變化，是目前*分子細(xì)胞生物學(xué)的分析儀器。
激光共聚焦顯微鏡比普通熒光顯微鏡獲得更高對比度、高分辨率圖像，同時(shí)具有高靈敏度，對檢測樣品無損傷、可靠和優(yōu)良重復(fù)性。激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率，實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒獾耐瑫r(shí)可觀察并可形成清晰的三維圖像等優(yōu)點(diǎn)，能比寬場看到的成像面更薄，更清晰，在較以往更短的采集時(shí)間內(nèi)輕松實(shí)現(xiàn)超高分辨率更大觀察視野成像。

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熒光顯微鏡

激光共聚焦顯微鏡